基于朗伯-比尔定律,通过微量检测基座(光程多为0.05–1mm),对1–5μL核酸/蛋白样品进行260nm、280nm、230nm特征波长吸光度检测,换算浓度与纯度。

一、常见干扰伪影及原因

气泡:导致尖峰毛刺、读数跳变。加样时应缓慢操作,避免产生气泡。
基座残留:导致基线抬高、A230异常,每次检测前须彻底清洁基座。
样品蒸发:微量液滴收缩导致浓度虚高,应在上臂关闭后立即测量。
光程污染:重复性差、空白异常,需用无酶超纯水定期清洁光纤端面。

二、全流程质量控制要点

开机空白质控:清洁基座(无尘纸+70%乙醇,风干)→同批次溶剂(无酶水/TE)校准空白→验证A260/A280读数接近0(±0.05以内)。

样品检测规范:取1.5–2μL,均匀覆盖检测基座,上臂轻压确保光程稳定,每样测量2–3次取均值,RSD应≤2%。

三、数据解读标准

A260/A280值:DNA纯品约1.8,RNA纯品约2.0。偏低说明蛋白质污染,偏高可能有RNA残留。
A260/A230值:正常范围1.8–2.2。偏低提示苯酚、胍盐、EDTA等试剂残留。

四、日常维护要点

每次使用后及时清洁基座,超纯水润洗后无尘纸轻拭;避免强酸碱样品直接接触光纤;每季度用标准溶液校准验证并留存记录;仪器存放于避光低湿环境,定期开机驱湿。